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DEL GEN A LA PROTEÍNA.
  EXPRESIÓN GÉNICA.
          Antes de Watson y Crick, lo que se
          conocía sobre los genes era muy poco:

       1. Los genes estaban asociados a caracteres
          específicos.
       2. La teoría un gen – un enzima ya se había
          propuesto.
       3. Los genes se localizaban en los
          cromosomas.
       4. Los cromosomas se componían de ADN y
          proteínas.
       5. Griffith y Avery apuntaron ya que el
          material genético era el ADN.

       Pero de todos estos datos a demostrar que el
          material encargado de transmitir los
          caracteres hereditarios era el ADN hubo
          que realizar unos cuantos experimentos,
          ya clásicos en la biología molecular.
LA TRANSCRIPCIÓN.
 DEL ADN AL ARNm
EL PROMOTOR
La ARN-polimerasa se
une a una secuencia
llamada promotor que
normalmente está
delante de la
secuencia que
especifica el RNA.

EN PROCARIOTAS, el
promotor tiene dos
zonas comunes que
son puntos de
reconocimiento de
polimerasa en las
regiones -10 y -35.
Esta secuencia de
bases está bastante
conservada:
•Región -10: TATAAT
•Región -35: TTGACA
ARN POLIMERASA PROCARIOTA
Sólo hay una forma 2„ formada por
cadenas polipeptídicas (holoenzima). Se
separa cuando el enzima trabaja.  se
une a elementos reguladores,  tiene el
centro activo, „ permite unirse al
molde, en esa unión participa  que es
importante para reconocer al promotor.


ARN POLIMERASA EUCARIOTA
Las distintas RNA polimerasas de
   eucariotas expresan distintos
   genes:
• I.- RNA precursor de los rRNAs
   (28s, 5,8s y 18s)
• II.- Genes que codifican para
   proteínas y 4 RNAs pequeños
   (snRNAs) implicados en “splicing”
• III.- tRNA, rRNA5s y otros RNAs
   pequeños (snRNAs)
QUÉ HACEN LAS RNA-POLIMERASAS


o Seleccionan los nucleótidos según el molde y forma
enlace fosfodiéster (ss. Diapositiva).
o Primero localiza el promotor y luego se suelta para
dejar el RNA libre.
o Las ARN polimerasas no tienen necesidad de un
cebador para iniciar la transcripción y son incapaces
de identificar y de eliminar un nucleótido mal
emparejado dentro de una cadena en síntesis.
FORMACIÓN DEL ENLACE
   FOSFODIÉSTER



 La ARN-polimerasa cataliza
 la síntesis de ARN en la
 cadena molde de ADN.
 El nucleótido trifosfato
 precursor se aparea con el
 correspondiente en la cadena
 molde.
 Se forma un enlace
 fosfodiéster entre la cadena
 de ARN en crecimiento y el
 precursor.
ESTRUCTURA DE UN GEN EUCARIOTA
     CODIFICANTE DE PROTEÍNA




1. PROMOTOR: secuencia que indica dónde debe comenzar le
   transcripción.
2. SECUENCIA CODIFICANTE: lleva la información para la
   síntesis de un péptido.
3. SECUENCIA DE TERMINACIÓN: indica dónde finaliza la
   transcripción.
LOS DIRERENTES TIPOS DE ARNs
                 Hay cuatro tipos de
                    ARN, cada uno codificado
                    por sus propios tipos de
                    genes.
                 1. ARN mensajero, que
                    codifica polipéptidos.
                 2. ARN transferente, que
                    porta los aminoácidos
                    durante la traducción.
                 3. ARN ribosómico, que
                    constituye los ribosomas.
                 4. ARN pequeños nucleares
                    (snRNA), que, junto con
                    proteínas, forma
                    complejos que procesan el
                    ARN. Sólo en eucariotas.
                 5. ARN de
                    interferencia, interviene
                    n en la regulación de la
                    expresión génica.
TRANSCRIPCIÓN EN
                         EUCARIOTAS
• Todos los genes tienen promotor y término.
• Hacen falta factores de transcripción (TF), como TFIIA, TFIIF, TFIID, etc.
• Hay una secuencia llamada caja TATA que es una secuencia de inicio de la
  transcripción del ADN.
• Muchos genes tienen secuencias que pueden estar lejos de ellos para
  reactivar la transcripción (enhancers o regiones amplificadoras).
• El mensaje está interrumpido por intrones que en el RNA se pierden.
• Es muy común que muchos RNA mensajeros terminen en una cola común
  llamada cola poliA añadida por una endonucleasa posteriormente.
MODIFICACIONES POSTRANSCRIPCIONALES DEL ARNm
Procariotas: no sufren procesamiento, funcionales tal y como son sintetizados. Participan en
la síntesis de proteínas incluso antes de acabarse de sintetizar.

Eucariotas: sufren diversas modificaciones.
1. Ocurre un procesamiento en los extremos de las moléculas, por lo
   que el mensaje se interrumpe a veces.
2. Mecanismo de “splicing”.
3. Todos los mRNA son modificados en el 5‟ (los 3 fosfatos) y se le
   añade una guanina que luego se metila (el extremo 5‟ también
   conocido cono gorra o “cap”, esencial para ser reconocida por el
   ribosoma).
4. La modificación 3‟: hay secuencia AAUAAA reconocida por la
   endonucleasa, que corta cerca de ella y añade cola poliA de 200 ó
   250 adeninas seguidas (señal de poliadenilación), que no tiene
   codificación génica.
PROCESAMIENTO DEL PRE-ARNm: “SPLICING”


Los pasos en el “splicing”
   (eliminación de intrones
   en eucariotas) del pre-
   ARNm son los siguientes:
1. El intrón forma un “lazo”
   denominado espliceosoma
   gracias a la unión de
   snRNP
   (ribonucleoproteínas
   pequeñas nucleares,
   formadas por snARN y
   proteínas).
2. El intrón se escinde y
   los exones adyacentes
   quedan unidos.
3. El ARNm maduro resultante
   sale del núcleo hacia el
   citoplasma.



     *** Volveremos más adelante sobre las modificaciones
     postranscripcionales.
TEST DE CONCEPTOS


http://www.phschool.com/science/biology_plac
        e/biocoach/transcription/quiz.html

    CON ESTE REPASO FINALIZAMOS LA
             TRANSCRIPCIÓN.
LA TRADUCCIÓN:
DEL ARNm AL PÉPTIDO
EL CÓDIGO GENÉTICO




El lenguaje genético consta de las cuatro bases nitrogenadas, que
se agrupan en tripletes. Por tanto, son posible 43 = 64 tripletes
diferentes. Cada triplete viene a codificar un aminoácido, y es
por esto que se dice que este código genético está degenerado,
pues existen más tripletes de los necesario: 64 tripletes para 20
aminoácidos.
TRADUCCIÓN EN CÉLULAS EUCARIOTAS.
COMPONENTES MOLECULARES DE LA TRADUCCIÓN.
                            1. ARNm. Su lectura comienza en
                            el extremo 5‟, con un triplete
                            iniciador AUG próximo a la
                            caperuza 5‟. Este triplete va
                            precedido de la secuencia AGGAGG
                            (secuencia de Shine-Dalgarno ) que es
                            la zona de unión con el ribosoma.

                      2. Ribosomas. En eucariotas, la
                      subunidad pesada es 60S y contiene
                      ARNr 28S, 5.8S, y 5S, además de cerca
                      de 50 proteínas ribosomales.. La
                      subunidad pequeña es 40S y contiene
                      ARNr 18S y cerca de 30 proteínas.


         3. ARN transferente (ARNt), con un extremo 3‟- CCA
         de unión al aminoácido, y con una zona de unión
         complementaria al codón de ARNm denominada
         anticodón. En ambos casos se trata de tripletes de
         bases nitrogenadas. Una enzima denominada ARNt-
         aminoacil-sintetasa une el aminoácido
         correspondiente a su ARNt en función de su
         anticodón.
ETAPAS EN LA TRADUCCIÓN

1.INICIACIÓN. El ARNm se une al ribosoma.
2.ELONGACIÓN. El ribosoma progresa a través de
  toda la cadena de ARNm, añadiendo los
  aminoácidos en función del código genético.
3.TERMINACIÓN. Finaliza la síntesis tras unas
  señales de STOP.
4.MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES.
1. INICIACIÓN.
Comienza con metionina en eucariotas y
   N-formil-metionina en procariotas,
   codificada por el codón AUG.
Continua asociación y disolución de las
   subunidades ribosomales gracias a
   factores de iniciación (IF-1, IF-2 e
   IF-3). La secuencia de formación de
   un ribosoma 70S es como sigue:
1. El ARNt que lleva la N-formil-
   metionina y GTP se une al IF-2, y el
   complejo resultante se une con la
   subunidad 30S, IF-3, ARNm e IF-1,
   rindiendo el llamado complejo de
   iniciación.
2. Este complejo se une con la subunidad
   50S formando el ribosoma completo; en
   este proceso el GTP se hidroliza en
   GDP y P y los tres factores de
   iniciación se disocian del ribosoma.
El ARNt queda posicionado en el sitio
   P.
2. ELONGACIÓN.
El ARNt iniciador se une al centro
   peptidilo, centro P, permaneciendo
   libre el llamado centro A. Tres
   fases.
1. Fase 1: unión del aminoacil-ARNt
   entrante en el centro A con su
  anticodón unido al correspondiente
  codón del ARNm. El GTP es
  hidrolizado.
2. Fase 2: formación del enlace
   peptídico. Se forma el primer
   enlace peptídico entre el grupo
   amino del ARNt entrante y el grupo
   carboxilo del ARNt iniciador (el N-
   formil-metionina). El producto es
   un dipeptidil-ARNt unido al centro
   A.
3. Fase 3: transposición. El ribosoma
   se traslada al nuevo codón del ARNm
   y simultáneamente cambia al
   peptidil-ARNt del centro A al
   centro P, quedando el centro A
   libre para la entrada de un nuevo
   ARNt.
3. TERMINACIÓN.
Tres codones especiales: UAG, UAA y
UGA.

Una vez que el último resto carboxílico
se ha unido a la cadena polipeptídica,
esta cadena todavía se encuentra unida
al ARNt en el centro A.

Unos factores de liberación se unen al
ribosoma para provocar un
desplazamiento del peptidil-ARNt desde
el centro A al P. El enlace éster entre
el ARNt y el péptido se hidroliza.

Una vez liberado el polipéptido, el
último ARNt y el ARNm abandonan el
ribosoma. El ribosoma 70S libre se
disocia en sus dos subunidades, proceso
que requiere de uno de los factores de
iniciación, pudiendo iniciarse un nuevo
proceso de síntesis.
RECURSOS INTERNET
http://www2.uah.es/biomodel/inicio.htm
http://vcell.ndsu.nodak.edu/~christjo/vcell/ani
  mationSite/transcription/movie.htm
http://www.phschool.com/science/biology_pl
  ace/biocoach/index.html
pcR:
  http://www.icampus.ucl.ac.be/SBIM2520/d
  ocument/genemol/biomolespa/PCR/PCR.h
  tml
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  • 1. DEL GEN A LA PROTEÍNA. EXPRESIÓN GÉNICA. Antes de Watson y Crick, lo que se conocía sobre los genes era muy poco: 1. Los genes estaban asociados a caracteres específicos. 2. La teoría un gen – un enzima ya se había propuesto. 3. Los genes se localizaban en los cromosomas. 4. Los cromosomas se componían de ADN y proteínas. 5. Griffith y Avery apuntaron ya que el material genético era el ADN. Pero de todos estos datos a demostrar que el material encargado de transmitir los caracteres hereditarios era el ADN hubo que realizar unos cuantos experimentos, ya clásicos en la biología molecular.
  • 2.
  • 3.
  • 5.
  • 6. EL PROMOTOR La ARN-polimerasa se une a una secuencia llamada promotor que normalmente está delante de la secuencia que especifica el RNA. EN PROCARIOTAS, el promotor tiene dos zonas comunes que son puntos de reconocimiento de polimerasa en las regiones -10 y -35. Esta secuencia de bases está bastante conservada: •Región -10: TATAAT •Región -35: TTGACA
  • 7. ARN POLIMERASA PROCARIOTA Sólo hay una forma 2„ formada por cadenas polipeptídicas (holoenzima). Se separa cuando el enzima trabaja.  se une a elementos reguladores,  tiene el centro activo, „ permite unirse al molde, en esa unión participa  que es importante para reconocer al promotor. ARN POLIMERASA EUCARIOTA Las distintas RNA polimerasas de eucariotas expresan distintos genes: • I.- RNA precursor de los rRNAs (28s, 5,8s y 18s) • II.- Genes que codifican para proteínas y 4 RNAs pequeños (snRNAs) implicados en “splicing” • III.- tRNA, rRNA5s y otros RNAs pequeños (snRNAs)
  • 8. QUÉ HACEN LAS RNA-POLIMERASAS o Seleccionan los nucleótidos según el molde y forma enlace fosfodiéster (ss. Diapositiva). o Primero localiza el promotor y luego se suelta para dejar el RNA libre. o Las ARN polimerasas no tienen necesidad de un cebador para iniciar la transcripción y son incapaces de identificar y de eliminar un nucleótido mal emparejado dentro de una cadena en síntesis.
  • 9. FORMACIÓN DEL ENLACE FOSFODIÉSTER La ARN-polimerasa cataliza la síntesis de ARN en la cadena molde de ADN. El nucleótido trifosfato precursor se aparea con el correspondiente en la cadena molde. Se forma un enlace fosfodiéster entre la cadena de ARN en crecimiento y el precursor.
  • 10. ESTRUCTURA DE UN GEN EUCARIOTA CODIFICANTE DE PROTEÍNA 1. PROMOTOR: secuencia que indica dónde debe comenzar le transcripción. 2. SECUENCIA CODIFICANTE: lleva la información para la síntesis de un péptido. 3. SECUENCIA DE TERMINACIÓN: indica dónde finaliza la transcripción.
  • 11. LOS DIRERENTES TIPOS DE ARNs Hay cuatro tipos de ARN, cada uno codificado por sus propios tipos de genes. 1. ARN mensajero, que codifica polipéptidos. 2. ARN transferente, que porta los aminoácidos durante la traducción. 3. ARN ribosómico, que constituye los ribosomas. 4. ARN pequeños nucleares (snRNA), que, junto con proteínas, forma complejos que procesan el ARN. Sólo en eucariotas. 5. ARN de interferencia, interviene n en la regulación de la expresión génica.
  • 12. TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS • Todos los genes tienen promotor y término. • Hacen falta factores de transcripción (TF), como TFIIA, TFIIF, TFIID, etc. • Hay una secuencia llamada caja TATA que es una secuencia de inicio de la transcripción del ADN. • Muchos genes tienen secuencias que pueden estar lejos de ellos para reactivar la transcripción (enhancers o regiones amplificadoras). • El mensaje está interrumpido por intrones que en el RNA se pierden. • Es muy común que muchos RNA mensajeros terminen en una cola común llamada cola poliA añadida por una endonucleasa posteriormente.
  • 13.
  • 14.
  • 15. MODIFICACIONES POSTRANSCRIPCIONALES DEL ARNm Procariotas: no sufren procesamiento, funcionales tal y como son sintetizados. Participan en la síntesis de proteínas incluso antes de acabarse de sintetizar. Eucariotas: sufren diversas modificaciones. 1. Ocurre un procesamiento en los extremos de las moléculas, por lo que el mensaje se interrumpe a veces. 2. Mecanismo de “splicing”. 3. Todos los mRNA son modificados en el 5‟ (los 3 fosfatos) y se le añade una guanina que luego se metila (el extremo 5‟ también conocido cono gorra o “cap”, esencial para ser reconocida por el ribosoma). 4. La modificación 3‟: hay secuencia AAUAAA reconocida por la endonucleasa, que corta cerca de ella y añade cola poliA de 200 ó 250 adeninas seguidas (señal de poliadenilación), que no tiene codificación génica.
  • 16. PROCESAMIENTO DEL PRE-ARNm: “SPLICING” Los pasos en el “splicing” (eliminación de intrones en eucariotas) del pre- ARNm son los siguientes: 1. El intrón forma un “lazo” denominado espliceosoma gracias a la unión de snRNP (ribonucleoproteínas pequeñas nucleares, formadas por snARN y proteínas). 2. El intrón se escinde y los exones adyacentes quedan unidos. 3. El ARNm maduro resultante sale del núcleo hacia el citoplasma. *** Volveremos más adelante sobre las modificaciones postranscripcionales.
  • 17. TEST DE CONCEPTOS http://www.phschool.com/science/biology_plac e/biocoach/transcription/quiz.html CON ESTE REPASO FINALIZAMOS LA TRANSCRIPCIÓN.
  • 19. EL CÓDIGO GENÉTICO El lenguaje genético consta de las cuatro bases nitrogenadas, que se agrupan en tripletes. Por tanto, son posible 43 = 64 tripletes diferentes. Cada triplete viene a codificar un aminoácido, y es por esto que se dice que este código genético está degenerado, pues existen más tripletes de los necesario: 64 tripletes para 20 aminoácidos.
  • 20.
  • 21. TRADUCCIÓN EN CÉLULAS EUCARIOTAS.
  • 22. COMPONENTES MOLECULARES DE LA TRADUCCIÓN. 1. ARNm. Su lectura comienza en el extremo 5‟, con un triplete iniciador AUG próximo a la caperuza 5‟. Este triplete va precedido de la secuencia AGGAGG (secuencia de Shine-Dalgarno ) que es la zona de unión con el ribosoma. 2. Ribosomas. En eucariotas, la subunidad pesada es 60S y contiene ARNr 28S, 5.8S, y 5S, además de cerca de 50 proteínas ribosomales.. La subunidad pequeña es 40S y contiene ARNr 18S y cerca de 30 proteínas. 3. ARN transferente (ARNt), con un extremo 3‟- CCA de unión al aminoácido, y con una zona de unión complementaria al codón de ARNm denominada anticodón. En ambos casos se trata de tripletes de bases nitrogenadas. Una enzima denominada ARNt- aminoacil-sintetasa une el aminoácido correspondiente a su ARNt en función de su anticodón.
  • 23. ETAPAS EN LA TRADUCCIÓN 1.INICIACIÓN. El ARNm se une al ribosoma. 2.ELONGACIÓN. El ribosoma progresa a través de toda la cadena de ARNm, añadiendo los aminoácidos en función del código genético. 3.TERMINACIÓN. Finaliza la síntesis tras unas señales de STOP. 4.MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES.
  • 24. 1. INICIACIÓN. Comienza con metionina en eucariotas y N-formil-metionina en procariotas, codificada por el codón AUG. Continua asociación y disolución de las subunidades ribosomales gracias a factores de iniciación (IF-1, IF-2 e IF-3). La secuencia de formación de un ribosoma 70S es como sigue: 1. El ARNt que lleva la N-formil- metionina y GTP se une al IF-2, y el complejo resultante se une con la subunidad 30S, IF-3, ARNm e IF-1, rindiendo el llamado complejo de iniciación. 2. Este complejo se une con la subunidad 50S formando el ribosoma completo; en este proceso el GTP se hidroliza en GDP y P y los tres factores de iniciación se disocian del ribosoma. El ARNt queda posicionado en el sitio P.
  • 25. 2. ELONGACIÓN. El ARNt iniciador se une al centro peptidilo, centro P, permaneciendo libre el llamado centro A. Tres fases. 1. Fase 1: unión del aminoacil-ARNt entrante en el centro A con su anticodón unido al correspondiente codón del ARNm. El GTP es hidrolizado. 2. Fase 2: formación del enlace peptídico. Se forma el primer enlace peptídico entre el grupo amino del ARNt entrante y el grupo carboxilo del ARNt iniciador (el N- formil-metionina). El producto es un dipeptidil-ARNt unido al centro A. 3. Fase 3: transposición. El ribosoma se traslada al nuevo codón del ARNm y simultáneamente cambia al peptidil-ARNt del centro A al centro P, quedando el centro A libre para la entrada de un nuevo ARNt.
  • 26. 3. TERMINACIÓN. Tres codones especiales: UAG, UAA y UGA. Una vez que el último resto carboxílico se ha unido a la cadena polipeptídica, esta cadena todavía se encuentra unida al ARNt en el centro A. Unos factores de liberación se unen al ribosoma para provocar un desplazamiento del peptidil-ARNt desde el centro A al P. El enlace éster entre el ARNt y el péptido se hidroliza. Una vez liberado el polipéptido, el último ARNt y el ARNm abandonan el ribosoma. El ribosoma 70S libre se disocia en sus dos subunidades, proceso que requiere de uno de los factores de iniciación, pudiendo iniciarse un nuevo proceso de síntesis.
  • 27. RECURSOS INTERNET http://www2.uah.es/biomodel/inicio.htm http://vcell.ndsu.nodak.edu/~christjo/vcell/ani mationSite/transcription/movie.htm http://www.phschool.com/science/biology_pl ace/biocoach/index.html pcR: http://www.icampus.ucl.ac.be/SBIM2520/d ocument/genemol/biomolespa/PCR/PCR.h tml Recopilado por tusclasesdeapoyo.com