El proceso de análisis de ADN involucra extraer el ADN de muestras biológicas, amplificar fragmentos específicos mediante la reacción en cadena de la polimerasa, secuenciar los fragmentos amplificados para determinar su tamaño, y analizar los resultados para comparar los perfiles genéticos de individuos y determinar la paternidad o exclusión.
2. Análisis de ADN; él Proceso de
estudio del ADN en los laboratorios.
• En el proceso de análisis de ADN , se estudian las
regiones polimórficas del ADN, de esta manera se
comparan los genes biológicos entre dos individuos. En
cada gen humano, se encuentran fragmentos llamados
locu y marcadores genéticos que son examinados por
los científicos para detectar el patrón hereditario del gen.
• Anteriormente, la manera de estudiar los marcadores
genéticos en el análisis de ADN (examen de ADN), era
mediante la técnica de hibridación con sondas, pero este
método requería grandes cantidades de ADN y que no
estuviera degradado. El avance en genética ha permitido,
mediante el método por reacción en cadena de
polimerasa (PCR), la extracción de ADN incluso desde
cantidades mínimas.
3. Proceso de análisis del ADN en el
examen de paternidad.
• Las estructuras de ADN se pueden extraer a
través de muestras de piel, uñas, pelo,
sangre… Actualmente, utilizando laboratorios
de alta tecnología, el análisis de ADN se puede
realizar desde muestras muy pequeñas. Una
vez recibidas las muestras en el laboratorio, el
proceso de análisis se realiza inmediatamente.
El procedimiento consiste en:
4. Extracción y purificación del ADN:
• Se separa la molécula de ADN del resto de los componentes
celulares. Hay varias substancias que pueden afectar en
este proceso, bien sea los soportes donde se encuentra la
muestra biológica (ropa…) o los propios reactivos para la
extracción. La técnica requerirá de más tiempo o resultará
más costosa en dependencia de tipo de muestra. La sangre
o saliva tiene un proceso de extracción más rápido y por
tanto más económico que un hueso o diente. Por esta
razón, la muestra de saliva mediante hisopo es la prueba
más aconsejada para el análisis de ADN.
• Cuantificación:
• Posterior a la extracción de ADN se realiza la cuantificación
de ADN, es decir mesurar la cantidad de ADN aislado y
valorar en que estado se encuentra (completo o roto).
5. Amplificación del ADN o también conocido como
análisis por reacción en cadena de polimerasa (PCR):
• Esta técnica se utiliza para ampliar un fragmento de ADN,
es muy útil en caso de no tener suficiente muestra de ADN,
en ese caso, se hacen copias de los marcadores del mismo
ADN para proceder a estudiarlo . El proceso consiste en
varias fases de altas y bajas temperaturas alternadas
mediante un aparato llamado termociclador, que permite
calentar y enfriar los tubos de reacción. En estos tubos, se
pone el ADN original junto con una mezcla que contiene
nucleótidos, polimerasa e iniciadores .Los iniciadores o ,
son moléculas de ADN sintetizadas de forma química que
se adhieren a la plantilla del ADN, permitiendo reconocer la
zona variable y propiciando el inicio de la reacción de
repetición. Los nucleótidos y polimerasa permiten la
extensión y multiplicación de la cadena de ADN.
6. Secuenciar:
• Una vez amplificado, se clasifican los fragmentos de ADN de
cada muestra en dependencia de su tamaño mediante el
proceso de electroforesis. En este proceso, los primers son
marcados fluorescentemente con unas moléculas
denominadas fluorocromos, para poder ser posteriormente
detectados por laser. Mediante el “analizador automático
de ADN”, un ordenador encargado de traducir los datos de
emisiones fluorescentes en secuencias, detecta los
marcadores de ADN y calcula su medida. Posteriormente
son transmitidos a una computadora especial que analiza la
información y asigna un repetido numero para cada
fragmento. Los resultados, se obtienen por medio de
ordenadores que facilitan su interpretación para el análisis
de ADN.
7. Análisis:
• Esta fase requiere entre 5 y 7 horas, en el cual el
programa informático hace un reporte de cada gen
examinado mediante un gráfico. Cada micro satélite
contiene dos picos en el gráfico, cada pico
corresponderá a los alelos del individuo. La posición de
cada pico en un gráfico es determinada por su
tamaño, por lo que si dos complementos genéticos de
un marcador son iguales en tamaño, aparecerán
superpuestos como un solo pico en el grafico .
• Por último, con el resultado obtenido en el análisis de
ADN, se determina la inclusión o exclusión en la
prueba de paternidad.