1. Influenza A Virus Antibody Test Kit
Kit de d€tection d’anticorps contre le virus de l’Influenza A
Kit para la detecci‚n de anticuerpos frente al Virus de la
Influenza A
Testkit zum Nachweis von Antikƒrpern gegen das Virus der
Influenza A
Part-Nr. 99-53101
Version: 53101-01
(ES) No. de registro: 1288-RD

2. VersiŽn Espa•ola
Kit para la detección de anticuerpos frente al Virus de la Influenza A
Para uso veterinario exclusivo.
Nombre y uso indicado
El kit de ensayos Influenza A Ab es un inmunoensayo enzim•tico para la detecciŽn de anticuerpos frente al virus de la Influenza A en
muestras de suero.
Información general
Las especies dom†sticas y silvestres se ven afectadas por los virus de la Influenza A. La enfermedad en s‘ se caracteriza por una amplia
variedad de respuestas, que van desde la ausencia virtual de signos cl‘nicos hasta mortalidad alta.
La virulencia de la influenza A var‘a con la cepa y/o aislamiento viral, la edad y el estatus inmunitario del animal, la presencia de
infecciones virales habituales y la eventual complicaciŽn con infecciones secundarias. Los signos respiratorios incluyen tos, descarga nasal
y/u ocular, estornudos y disnea. La hipertermia puede observarse en asociaciŽn con anorexia, p†rdida de peso, letargia y postraciŽn.
Debido a la variaciŽn y gravedad de los s‘ntomas cl‘nicos, las pruebas serolŽgicas nos aportan importantes ventajas para la detecciŽn de la
Influenza A. La vigilancia de la exposiciŽn de grupos animales se facilita con la mediciŽn de anticuerpos frente al virus de la Influenza A en el
suero.
Descripciones y principios
Este ensayo est• dise•ado para medir el nivel relativo de anticuerpos frente a la Influenza A en muestras de suero. El ensayo se realiza en
placas de 96 pocillos que se tapizan con el ant‘geno viral de la Influenza A. Tras la incubaciŽn de la muestra a analizar en los pocillos
tapizados, el anticuerpo espec‘fico frente a la Influenza A forma un complejo con el ant‘geno. Tras eliminar el material no unido, se a•ade
un conjugado enzim•tico de anticuerpos monoclonales anti-Influenza A a los pocillos. Si no hay anticuerpos frente a la Influenza A
presentes en la muestra a analizar, el conjugado puede reaccionar libremente con el ant‘geno de la Influenza A presente en la placa. Al
contrario, si hay anticuerpos frente a la Influenza A presentes en la muestra, el conjugado anti-Influenza A no puede unirse al ant‘geno. El
conjugado no unido se elimina mediante lavado y se a•ade un sustrato enzim•tico. El color que aparece a continuaciŽn es inversamente
proporcional a la cantidad de anticuerpos anti-Influenza A en la muestra a analizar.
Reactivo Volumen
1. Placas tapizadas con ant‘geno del virus de la Influenza A 5
2. Control positivo de Influenza A 2,0 ml
3. Control negativo 2,0 ml
4. Conjugado Anti-Influenza A :HRPO 55 ml
5. Diluyente de las muestras 235 ml
H. Sustrato TMB 60 ml
I. SoluciŽn de frenado 60 ml
8. SoluciŽn concentrada de lavado (10X) 235 ml
Materiales necesarios y no suministrados
Pipetas de precisiŽn y un pipeteador multicanal con puntas de pipetas desechables, lector de placas de 96 pocillos, tubos de ensayo para
diluir muestras, agua destilada o desionizada y dispositivo para dispensaciŽn y aspiraciŽn de soluciŽn de lavado.
Precauciones y advertencias para los usuarios
Manipular todos los materiales biolŽgicos de la Influenza A como si pudieran transmitir la Influenza A. Las placas tapizadas con ant‘geno
podr‘an ser una fuente de Influenza A. Antes del tapizado en la fase sŽlida, se ha inactivado el ant‘geno mediante tratamiento qu‘mico. No
obstante, no hay que presuponer su inactivaciŽn total. Algunos componentes del kit contienen azida de sodio como conservante. La
eliminaciŽn requiere lavar con agua en abundancia las ca•er‘as para que no se formen complejos de cobre o azida de plomo que podr‘an
explotar por percusiŽn. No exponer las soluciones TMB a luz intensa o a agentes oxidantes. Conservar todos los reactivos a 2€C–8€C.
Todos los desechos deber‘an descontaminarse apropiadamente antes de eliminarse. No utilizar componentes despu†s de su fecha de
caducidad y no mezclar componentes de kits con distintos n’meros de lote. Para mantener la precisiŽn y la exactitud, el pipeteado y el
lavado deben hacerse con cuidado a lo largo de este procedimiento. El estricto seguimiento de este protocolo garantizar• unos resultados
Žptimos. SŽlo para uso veterinario.
Preparación de las muestras
Influenza A Ab - Version 53101-01 5/9

3. Diluya las muestras 10 veces (1/10) con el diluyente de muestras antes de analizarlas (por ejemplo, mediante la diluciŽn de 15 “l de
muestra con 135 “l del diluyente de muestras).
NOTA: NO DILUYA LOS CONTROLES. No olvide cambiar las puntas para cada muestra. Las muestras deben estar mezcladas
correctamente antes de dispensarlas.
Preparación de la solución de lavado
El concentrado de lavado 10X debe dejarse atemperar hasta que alcance la temperatura ambiente, (18€C–25€C), y luego mezclarse para
asegurar la disoluciŽn de las sales precipitadas existentes. El concentrado de lavado debe diluirse a 1/10 con agua destilada/desionizada
antes de utilizarse (por ejemplo, 30 ml de concentrado m•s 270 ml de agua por placa analizada).
Procedimiento de análisis
Espere a que los reactivos alcancen la temperatura ambiente (18€C–25€C) y luego mezcle mediante inversiones y giros.
1. Tome una o m•s placas tapizadas con ant‘geno y anote la posiciŽn de la muestra en una ficha de trabajo.
2. Dispense 100 “l de control negativo NO DILUIDO en dos pocillos.
3. Dispense 100 “l de control positivo NO DILUIDO en dos pocillos.
4. Dispense 100 “l de muestra diluida en los pocillos correspondientes.
5. Incube durante 60 minutos (ƒ 5 minutos) a temperatura ambiente (18€C–25€C).
6. Lave cada pocillo con aproximadamente 350 “l de soluciŽn diluida de lavado por 3 a 5 veces.
7. Dispense 100 “l de suero anti-Influenza A conjugado con peroxidasa de r•bano en cada pocillo.
8. Incube durante 30 minutos (ƒ 2 minutos) a temperatura ambiente (18€C–25€C).
9. Repita el paso 6.
10. Dispense 100 “l de soluciŽn sustrato TMB en cada pocillo.
11. Incube durante 15 minutos (ƒ 1 minuto) a temperatura ambiente (18€C–25€C).
12. Dispense 100 “l de soluciŽn de frenado en cada pocillo para detener la reacciŽn.
13. Calibre el lector en blanco con aire.
14. Meda y anote los valores de la absorbancia a 650nm, A(650).
Resultados
Para que el ensayo sea v•lido, la absorbancia media A(650) del control negativo debe ser superior o igual a 0,600, y la relaciŽn M/N del
control positivo debe ser inferior a 0,50. En el caso de an•lisis no v•lidos, la t†cnica podr‘a ser la causante y habr‘a que repetir el ensayo.
La presencia o ausencia de anticuerpos frente a la IA se determina por la relaciŽn muestra-control negativo (M/N) para cada muestra.
Cálculos
Media del control negativo (CNx) = CN1 A(650) + CN2 A(650)
1.
2
Media del control positivo (CPx) = CP1 A(650) + CP2 A(650)
2.
2
RelaciŽn M/N = Media de la Muestra A(650)
3.
CNx
Interpretación de los resultados
Suero aviar:
Las muestras con valores M/N < 0,50 deber•n considerarse positivas a la presencia de anticuerpos frente a la Influenza A.
Las muestras con una relaciŽn M/N ≥ 0,50 se consideran negativas a la presencia de anticuerpos frente a la Influenza A.
Suero de otras especies:
Las muestras con valores M/N < 0,60 deber•n considerarse positivas a la presencia de anticuerpos frente a la Influenza A.
Las muestras con una relaciŽn M/N ≥ 0,60 se consideran negativas a la presencia de anticuerpos frente a la Influenza A.
La inactivaciŽn del suero por calor puede dar como resultado falsos d†biles positivos en muestras de gansos.
Influenza A Ab - Version 53101-01 6/9

4. Manufacturer/Hersteller/Fabricant/Fabricante Distributor/Vertrieb/Distributeur/Distribuidor
INSTITUT POURQUIER SAS IDEXX Laboratories B.V.
326 rue de la Galera Scorpius 60
34090 MONTPELLIER – France 2132 LR HOOFDDORP – The Netherlands
_______________________________________________________________________________________________________
Influenza A Ab - Version 53101-01 9/9