IDENTIFICACION DE ANTIGENOS- RESPUESTA INMUNE

1. Identificación y medición de laIdentificación y medición de la
respuesta inmunerespuesta inmune
PRUEBAS SECUNDARIAS

2. § SOLUBLE
§ PARTICULADO
§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO
PRECIPITACIÓN
AGLUTINACIÓN
FIJACIÓN DE
COMPLEMENTO
La prueba a realizar depende de las
características del Ag

3. Comparación precipitación - aglutinación
Antígeno
SOLUBLE
Antígeno
PARTICULADO
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Formación de “retículo” “Amontonamiento”
Y
YY
Y
PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN
Anticuerpo

4. PRECIPITACIÓN
Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en
contacto con su anticuerpo específico, forma
complejos inmunes que al encontrarse en
proporciones óptimas se insolubilizan dando una
reacción de precipitación

5. Ag/mg
Precipitación
Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
Y Y
Y Y
Y
Exceso de AC
Proporciones
óptimas
Exceso de Ag
YY
AC ESPECÍFICO
Ag SOLUBLE
MEDIO
PROPORCIÓN
YY
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
RETÍCULO
SOLUBLE

6. MEDIO
LÍQUIDO SÓLIDO
• DIFUSIÓN DOBLE
• INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
• INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
• CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)
Test de Ascoli - Valente
CARBUNCLO

7. DIFUSIÓN DOBLE
Fundamento: empleando el medio adecuado (agar
gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag
como Ac (difusión “doble”), de modo que al
encontrarse en proporciones óptimas,
interaccionen, produciendo una banda de
precipitado visible
Inmunodifusión en Gel de Agar
Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

8. Test de Coggins para AIE
Placa de Petri
1. Agar gel 1
26
7
5
4
3
2.Sacabocados
3. Suero problema
1 3 5
4. Suero testigo (+)
(reactivo)
2 4 6 5. Antígeno específico
(reactivo)
7
1
26
7
5
4
3
26
7
4
26
7
4

9. 6.Cámara húmeda
48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN
A
C B
A. NEGATIVO
B. POSITIVO
C. Débilmente POSITIVO
D. NEGATIVO
E. Fuertemente POSITIVO
F. POSITIVO
G. POSITIVO
H. Banda INESPECÍFICA
I. Banda INESPECÍFICA
26
7
4
D
F E
G
I H

10. APLICACIONES EN VETERINARIA
§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA
§ PIROPLASMOSIS EQUINA
§ LEUCOSIS BOVINA
§ BRUCELOSIS OVINA
§ BRUCELOSIS CANINA

11. AGLUTINACIÓN
Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo:
bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su
anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une
por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión
agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

12. Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con
respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de
tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión
de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de
dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la
aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de
sueros muy positivos.
FENÓMENO DE ZONA O PROZONA

13. AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN PASIVA
COAGLUTINACIÓN
HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.
A
G
L
U
T
I
N
A
C
I
Ó
N

14. Antígeno
particulado
(reactivo)
+
YY
YY Y
Suero problema
Proporción
Medio
Y
Y
Y
YY
AGLUTINACIÓN

15. AGLUTINACIÓN
En PLACA En TUBO
BrucellaSalmonella Micoplasma
BPA
Brucella
SAT+2-ME PAL

16. Aglutinación en placa: BPA
1. Suero problema 2. Antígeno específico
(reactivo)
Aglutinoscopio + placa de
vidrio
Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado

17. 3. Mezclar
8 MINUTOS
LECTURA E
INTERPRETACIÓN
Con GRUMOS Sin GRUMOS
AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

18. Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME
SAT (Seroaglutinación en Tubo)
Ig M Ig G
2- ME (2- Mercaptoetanol)
Se realizan en
simultáneo

19. En TUBO: SAT + 2- ME
SUERO
BPA (+)
1. Suero problema
Título
SAT
2-ME
37ºC-48 hs
2. Solución fisiológica fenicada (SFF)
2. Solución 2-ME
3. Antígeno
60 MINUTOS
1/25 1/50 1/100 1/200

20. LECTURA e INTERPRETACIÓN
37ºC-48 hs
POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA

21. Aglutinación en tubo: PAL
PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE
Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra
un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno
particulado coloreado, ambos se unirán, formando un
complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y
asciende con la nata

22. 1. Leche problema
2. Antígeno (reactivo)
37ºC-1 hora
LECTURA e INTERPRETACIÓN
+ ++ +++ ++++
PAL

23. APLICACIONES EN R. A.
BRUCELOSIS BOVINA
PAL - ELISA IVIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA
FCDEFINITORIA
SAT + 2-ME – FPA
ELISA C
COMPLEMENTARIAS
BPA – ELISA ITAMIZ
Prueba

24. v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN
v IN VIVO PROTECCIÓN
PRUEBAS TERCIARIAS

25. NEUTRALIZACIÓN
Fundamento: estimación de la capacidad de una
anticuerpo de neutralizar la actividad biológica
de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

26. PROTECCIÓN
Fundamento: forma de análisis de neutralización
que se realiza totalmente in vivo para determinar
la capacidad protectora de un anticuerpo
específico frente a su antígeno

27. RESPUESTA INMUNE CELULAR
v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B
v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS