Aquest és el treball sobre la malaltia de Glässer (Hemophilus parasuis)

1. IRTA-CReSA. Col·laboració en
tasques de laboratori
Programa Argó 2015
Ana Serrano, Olga Valero i Marina Nieves

2. Índex
1. Haemophilus parasuis
2. Cultius bacterians
3. Tinció Gram
4. Procediment PCR,Eric-PCR, PCR de
virulència
5. Conclusió

3. Haemophilus parasuis
-Colonitzador primari del tracte respiratori dels garrins.
-Agent causal de la malaltia de Glässer.
-Molt heterogeni (varietat de soques).

4. Diagnòstic
Objectiu: Generar cultius de colònies aïllades i observar el creixement
Procediment: Estendre hisop en dues zones per la placa d’agar xocolata.
Deixar reposar el cultiu a l’estufa (37ºC, 5% CO2)
Resultat:
CULTIU BACTERIÀ 1

5. Objectiu: Caracteritzar les colònies cultivades
Procediment: A partir de les colònies aïllades cultivades intentem tornar a
generar un cultiu en plaques agar sang i agar xocolata. Deixem reposar 24
hores en les mateixes condicions.
Resultat:
CULTIU BACTERIÀ 2

6. Tinció Gram
1. Agafem part del cultiu i el posem en el portaobjectes.
2. Tenyim la mostra en cristall violeta.
3. Afegim lugol per fixar-ho.
4. Hi introduïm alcohol.
5. Tenyim la mostra amb safranina.

7. Procediment PCRs
1. Extracció DNA a partir dels cultius obtinguts
2. Preparació de la solució necessària PCR (H2O, MgCl2, Buffer,
primers, enzim Taq, nucleòtids)
3. Introduïm en diferents strips la solució i el DNA extret de cada
mostra.
4. Ho introduïm al termociclador seguint els temps i les temperatures
corresponents a cada PCR, i el posem en funcionament.
5. Correm el gel per poder observar els resultats.

8. Procediments PCRs

9. PCR PATOLÒGICA
Objectiu: Comprovació de la presència
de Haemophilus parasuis a les
mostres.
ERIC-PCR
Objectiu: Determinar el tipus de soca
causant del cas clínic.
PCR DE VIRULÈNCIA
Objectiu: Determinar si la soca és
virulenta o no virulenta.
NV NV - NV V V V Control Control

10. Conclusions
• Podem concloure que els garrins estaven infectats per la bactèria
Haemophilus parasuis.

11. Gràcies per la vostra atenció