1. ABDUL RAHIM muhammad najhan
2ème année DUT CHIMIE
2012/2013
Maître de stage :
LEMASSON Sylvia

2. Plan
 Introduction de l’électrophorèse
 Principe de l’électrophorèse
 Gliadines
 Déroulement
 Conclusion

3. Introduction de l’électrophorèse
 Permettre de connaître la
composition d’un
mélange de blé présente
dans le lot.
 Permet de savoir si le
profil électrophorétique
de ces grains est stable
ou pas.

4. Principe de
l’électrophorèse
des gliadines
• Basée sur la
migration
différentielle de
particules
chargées
électriquement.
•Protéines très
chargées et de
petites tailles
migrent vite, et
vice versa.

5.  Après extraction dans
l’éthanol, les gliadines en
milieu acide, chargées
positivement.
 Elles vont migrer vers la
cathode (pôle -) de la cuve
électrophorétique.

6. Pourquoi travaillons nous avec les gliadines ?

7.  Simple à solubiliser et pas de réarrangement.
 Gluténines : poids moléculaires élevés.
: difficiles à séparer.
: tendance à se réarranger
entre elles.

8. Déroulement
 Dans une journée, il y a 40 grains à analyser
 Pour simplifier, il faut organiser la journée.

9. Le schématique d’une journée

10. Echantillonnage
•Peser grain par grain.
•Ecraser les et mettre
dans les microtubes.
•Ajouter la solution
chloro-2-éthanol.
•Laisser en contact au
moins une journée.

11. Mise en place du matériel
•Homogénéiser les
microtubes au vortex et
centrifuger les.
•En attendant, faire le
support de coulage et
préparer les matériaux.

12. Polymérisation
 Prélever 70 mL de la
solution acrylmide et y
ajouter 330 mL d’eau
oxygénée.
 Couler les gels entre les 2
plaques rapidement.
 Atendre 5 minutes pour
la polymérisation.

13. Méchanism de la polymérisation
 Polymérisation d’un monomère acrlyamide + un co
monomère, NN-méthylène bisacrylamide résulte le
gel de polyacrylamide.
 Le gel est polymérisé par réaction en chaine.

14. SO4
2- ACRYLAMIDE BISACRYLAMIDE

15. Initiation
Propagation

16. Répétition n fois résulte le gel de polyacrylamide
Terminaison

17. Le dépôt d’extraits des protéines

18. L’électrophorèse
•Commencer l’électrophorèse
quand tout sera prêt.
•Appliquer la tension 800 volts
pendant la migration.
•Les protéines sont chargées
positivement, donc migrent vers
la cathode (-).

19. La coloration des gels
 Dès que, tous les
protéines sont migrées,
arreter l’électrophorèse.
 Démouler les gels et
disposer séparément.
 Ajouter 250 mL la
solution colorante.
 Laisser agiter au moins
24 heures avant la
lecture.
 25 mL solution de bleu
coomasie + 95 mL acide
trichloroacétique + QSP
500 mL l’eau.
 Soit, il y a 2 gels différents à
chaque synthèse.

20. La lecture de diagramme électrophorétique
 Nous observons 20 bandes
protéiques.
 Il y a 4 zones de migrations
bien distinctes.
 ω-gliadines, γ-gliadines, β-
gliadines, et ά-gliadines.
 Grâces à ces gliadines, la
détermination la variété de
blé est possible.

22. Résultat

23. Exemple
•Sogby, il a 2 types
•Sogby type 1 = 40,4+
•Sogby type 2 = 40,4-

24. CONCLUSION

25. MERCI BEAUCOUP 