1. Informe de
Técnicas de
Aglutinación
por
Miguel Angel Figueroa Núñez
Inmunología Clínica
TM. Marcelo Ramirez Sandoval

2. TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN
¿QUÉ SON LAS TECNICAS DE AGLUTINACIÓN
SU UTILIDAD EN EL CAMPO CLÍNICO
OBJETIVOS
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MATERIALES Y METODOS
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MATERIALES UTILIZADOS
METODOS OCUPADOS
PROCEDIMIENTO Y CONTROL DE CALIDAD
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INTERPRETACIÓN
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RESULTADOS OBTENIDOS
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
IMPORTANCIA EN EL DIAGNOSTICO DE PATOLOGÍAS INMUNOLOGICAS
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3. INTRODUCCION
¿QUÉ SON LAS TECNICAS DE AGLUTINACIÓN?
Las tecnicas de aglutinación son aquellas que aprovechandose de la capacidad de las
interacciones antigenos-anticuerpos, se realizan reacciones controladas en donde podemos
observar aglutinacion de los elementos en estudio, lo que nos acerca a la cualificación y
semicuantificación.
Esta unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interacción reversible en la que están
involucrados enlaces no-covalentes. En la interacción in Vitro de un Ag con su
correspondiente Ac se distinguen 2 etapas: la interacción primaria no visualizable y la
interacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por la aparición de un
fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación. Por otro lado, no siempre que se
produce la interacción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya que, para
conseguir fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y
características de los Ags y Acs.
La revolución de esta tecnología que ha sido aprovechada
en los distintos campos de las ciencias de la salud, ha sido
el paso evidente hacia un diagnostico mas certero y
oportuno.
Las reacciones de aglutinación, involucran una interacción secundaria entre Ag-Ac (Fig.
2b). Estas generaran la aparición de un aglutinado que se visualiza en grumos. Los
principios físico-químicos que controlan la formación de estos aglutinados son los mismos
que gobiernan la formación de un precipitado. La gran diferencia entre las reacciones de
precipitación y de aglutinación son las características del antígeno: mientras que en las
reacciones de precipitación se emplean antígenos solubles, en las reacciones de
aglutinación el Ag es particulado. (Fig, 2a)
Con un Ag soluble, también es posible diseñar una reacción de aglutinación gracias a que
es posible utilizar distintas partículas (partículas inertes ó glóbulos rojos) y realizar un
pegado químico o físico-químico del Ag soluble a dichas partículas, generando de esta
manera un “Ag particulado” útil para fines diagnósticos.
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4. SU UTILIDAD EN EL CAMPO CLÍNICO
Desde la aparición de este método, se han logrado desarrollar diversos test que van desde
los grupos sanguíneos, la presencia de anticuerpos lupicos (presencia de Lupus Eritematoso
Sistémico), Factor reumatoide y otros que han aportado a pruebas de gran relevancia para
enfrentar un diagnóstico, con lo cual hoy son parte fundamental de todos los campos
clínicos y de gran parte de los laboratorios en las cuales el tecnólogo se desarrolla.
Como se menciona anteriormente estos métodos son cualitativos y semicuantitativos, por
lo que siempre requieren de cuantificación con técnicas más sensibles y exactas en el caso
de positividad y en algunas pueden ser un definitivo resultado de lo que se busca.
OBJETIVOS
1.
2.
3
Determinar mediante la reacción de aglutinación Factor Reumatoide utilizando
partículas de Látex, en muestras problema.
Determinar por la técnica de aglutinación su grupo sanguíneo.

5. MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES UTILIZADOS
INSUMOS
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Kit de antisueros para determinar grupo ABO y RH.
Micropipeta de 10uL-100uL.
Puntas desechables amarillas.
Tubos de Khan 75x13 mm.
Placas vidrios o de cartón para realizar la reacción de aglutinación.
Cronómetro.
Guantes.
EQUIPOS
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Centrifuga.
Vortex.
METODOS OCUPADOS
PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA
LA DETERMINACIÓN DE FACTOR REUMATOIDEO (FR).
Factor reumatoide es un autoanticuerpo con especificidad para determinantes antigénicos
del fragmento Fc de inmunoglobulina G humana y de ciertos animales.
Existe Factor reumatoideo de las tres clases de inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM. Las más
comunes son clase IgG e IgM.
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO
El FR se detecta mediante una reacción Antígeno-Anticuerpo de aglutinación en placa. El
reactivo de látex consiste en una suspensión de partículas de látex estabilizadas con
albúmina, a estas partículas están unidas químicamente gammaglobulinas humanas
desnaturalizadas, que una vez en contacto con el suero del paciente se produce la reacción
(Ag - Ac), visualizándose una aglutinación macroscópica.
Los reactivos provistos son para uso diagnóstico “in Vitro”. Los controles han sido
ensayados para HIV y HBV, encontrándose no reactivos. No obstante deben ser empleados
como si se tratara de material infectivo... Debe usar sus accesorios estándar de protección
de bioseguridad (Guantes, Delantal, Anteojos de seguridad)
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6. PROCEDIMIENTO
1.
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6.
7.
8.
Para ambas experiencias llevar los reactivos y las muestras a temperatura
ambiente antes de usar. Agitar el reactivo de látex antes de usar, vaciando
previamente la pipeta del gotero.
Crear hoja de trabajo para registrar sus resultados
Agregar 25 uL de la muestras o controles.( Colocar en el primer pocillo de la
placa 25 ul del control negativo, en el segundo pocillo colocar 25 ul del reactivo
de control positivo en los posillos siguientes agregar las muestras a estudiar
Agregar 25 uL de reactivo de Látex a cada uno de los pocillos
Mezclar con un palillo desechable hasta obtener una suspensión uniforme en
toda la superficie del círculo.
Inmediatamente disparar un cronómetro, balancear suavemente la placa y
observar macroscópicamente el resultado bajo un haz luminoso dentro de los 2
minutos siguientes.
Registrar sus resultados negativos y controles.
Titular a punto final sus muestras positivas con diluciones seriadas en múltiplo
de 2 y hacer reaccionar cada una de estas diluciones con el reactivo de látex e
informar título final
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.
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

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Negativo: Suspensión homogénea.
Positivo: Aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos.
Titulo Final: Última dilución con aglutinación.

7. PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA
DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO
PROCEDIMIENTO
a)
b)
c)
d)
Limpie su dedo índice con alcohol.
Pinche su dedo con lanceta utilizando el lápiz portalanzeta.
Deposite cuatro gotas de sangre sobre un portaobjetos, lo más separadas posible.
Deje caer una gota de suero anti A, anti B, anti AB y anti RH sobre cada gota de
sangre. Mezcle por rotación de la placa.
RESULTADOS
1) Esquematice y explique los resultados de aglutinación obtenida e informe el
grupo sanguíneo de su muestra de sangre.
2) Informe sobre las características de los grupos sanguíneos ABO-Rh y otros
grupos sanguíneos
INTERPRETACIÓN
RESULTADOS OBTENIDOS
PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA
LA DETERMINACIÓN DE FACTOR REUMATOIDEO (FR).
CONTROL
NEGATIVO
MUESTRA 2
SUERO 204
6
CONTROL
POSITIVO
MUESTRA 3
SUERO 206
MUESTRA 1
SUERO 410
Fig.3a

8. DILUCIÓN
1/2
DILUCIÓN
1/4
DILUCIÓN
1/16
DILUCIÓN
1/8
Fig. 3b
PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA
DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO
GRUPO A
GRUPO B
GRUPO AB
GRUPO RH
Fig. 4
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9. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA
LA DETERMINACIÓN DE FACTOR REUMATOIDEO (FR).
En esta prueba se realizaron la determinación de 3 muestras problemas con un título de ½
y los controles correspondientes (Negativo y Positivo respectivamente provisto por el kit).
De ellos se determino que solo la muestra número 1 (suero 410), era negativa. Por lo que
consiguientemente escogí la muestra número 2 (suero 204), para realizar el análisis
semicuantitativo a través de diluciones seriadas.
En ella se aprecia (Imagen 3b), que aunque débilmente la aglutinación se presenta hasta el
4 título, o sea la dilución 1/16.
Por lo que el resultado de la muestra n°2 es mayor que 1/16. Esto quiere decir que concentra
gran cantidad de factor reumatoide como antígeno en suero lo que es detectado por los
anticuerpos provistos en el kit que al poseer latex, revela su aglutinación en forma de
pequeña arenilla blanca.
El análisis he interpretación es rápido (menos a 2 minutos).
PRUEBA DIRECTA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA PARA LA
DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO
En esta prueba a través de una pequeña punción en el pulpejo del dedo, enfrentamos
diversas gotas de nuestra sangre a los distintos tipos de anticuerpos que están presentes en
la tipificación de la sangre. Lo que nos llevó a la conclusión de que la presencia de
aglutinación de la sangre, sería correlativa a la presencia de dichos grupos.
Esto nos arrojó que tanto en mi sangre como en la de mi compañera (Bárbara Bustos), solo
presentaran aglutinación en el factor Rh de la sangre. Presenciando evidentemente que
pertenecemos al grupo O Rh+ (véase en la imagen n°4).
IMPORTANCIA EN EL DIAGNOSTICO DE PATOLOGÍAS
INMUNOLOGICAS
Como sabemos, la importancia de estos screening test es revelar la presencia de
Antígenos que nos den luces para un diagnóstico certero.
Ya sea en la búsqueda del grupo sanguíneo como la determinación de factor reumatoide
en una muestra, estos son de vital importancia, conjunto a la anamnesis a un conjunto de
análisis bioquímicos y de inmunología clínica, para obtener un diagnóstico y enfocar un
tratamiento certero.
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10. Con respecto a nuestro trabajo, las muestras positivas de factor reumatoide, deben ser
controladas y semicuantificadas, con tal de llegar un estimado de su concentración, lo que
nos puede develar una posible artritis reumatoide o incluso un Síndrome de Sjogren.
Ambas enfermedades que deploran la calidad de vida de los que la padecen, pero que al
menos con un buen diagnóstico y un tratamiento temprano, puede ayudar a controlar el
avance y mejorar la calidad de vida de quienes la padecen.
Sumado a esto, es importante destacar como la inclusión de los factores de la sangre se
vuelven vitales a la hora de evitar rechazos transfusionales entre individuos y lograr el
mejor equilibrio en el caso de implementar esos métodos en urgencias u operaciones de
alta importancia.
REFERENCIAS
1) Ramirez, Marcelo. Manual de Laboratorio de Inmunología
Clínica. Edición 2013. Santiago, Chile. Pags. 3-6.
2) Dugdale, David. Et al. Prueba de aglutinación en látex. Revisión
2013. Medline Plus. EEUU.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003334.
htm
3) H, Tighe. Et al. Factor Reumatoideo (FR). Revisión 2011. Medline
Plus. EEUU.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003548.
htm
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