1. Capitulo 13 DNA: de copias.
En los cromosomas hay 30,000 genes cada Enzima restrictiva- Compuesto químico que
uno tiene una función. Tienen 3 x 109 pares corta el DNA en un lugar en específico.
de células.
Impresión de DNA:
Nucleótido- Consiste de una azúcar, fosforo y
Tandem Repeats (TR)- Es una región en el
una base nitrogenada. La azúcar es una
cromosoma que contiene secuencias de
pentosa, fosforo de fosfato y las bases
bases repetidas un número de veces, 30%
nitrogenadas (Adenina, Citocina, Guanina,
del genoma está compuesto de segmentos
Timina).
repetidos. En humanos tienen el mismo tipo
El material genético consiste de una hilera de de repeticiones pero no existe mucha
nucleótidos, esta hilera está unida a otra por variación en el número de repeticiones.
Puentes de Hidrogeno formando una doble
Restriction Fragment Length Polimorphisms-
hélice. El puente de Hidrogeno lo forman la
(RFLP)- Son fragmentos de diferentes largos
unión de base complementaria, Adenina se
de par de bases que se producen al cortar el
une a Timina (A=T) y Guanina a Citocina
DNA con una enzima restrictiva. Típicamente
(G=C). Si en una hilera esta Adenina en la
una secuencia medular consiste de 15 a 35
otra hilera esta Timina y viceversa. Lo mismo
bases de larga y la misma se repite miles de
con Guanina y Citocina una base está en una
veces.
hilera y la otra en otra hilera. Ambas hileras
contienen la misma información genética.
Reacción de cadenas de Polimerasa- (PCR)
técnica para reproducir una porción de la
hilera de DNA. Esta técnica produce millones
En la técnica RFLP la enzima restrictiva corta
los cromosomas en cientos de fragmentos.
Algunos de estos fragmentos van a tener las
secuencias repetidas consecutivas. El DNA se
trata químicamente después de la
Electrophoresis para separar las hileras
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2. cortadas. El material de DNA se coloca en la RFLP- Fue utilizada en el análisis de la
gelatina electrophoretica y se le aplica la mancha de semen del traje azul de Mónica
corriente eléctrica para separar los Lewinsky. Hubo pareo con la muestra del
fragmentos según su tamaño. Los más Presidente Clinton.
pequeños y de menor peso se mueven más
rápido que los más grandes y pesados. Los Probabilidad:
fragmentos son transferidos a una Negro- 1.440 x 1012
membrana de nylon utilizando una técnica
que se conoce como Southern blotting. Blanco- 7.870 x 1012
Luego se hace la Hibridización que consiste
Hispano (este)- 3.14 x 1012
en añadir sondas marcadas con el material
radioactivo que contiene la secuencia de Hispano (oeste)- 9.43 x x1011
bases complementarias de la secuencia
repetida consecutiva.
Luego la membrana de nylon se coloca
contra una placa de rayos x y se deja exponer
por varios días. Los marcadores radioactivos
hacen que se marquen las bandas en la
placa. Se corren fragmentos de DNA
conocidos para determinar el largo de cada
fragmento. Se van a producir dos (2) bandas
una por cada cromosoma. Un número
limitado de la población va a tener el mismo
fragmento de DNA por lo tanto NO es una
prueba individualizada.
Se utilizan diferentes sondas que reconocen
diferentes segmentos de repeticiones en el
DNA. Aumento la capacidad discriminatoria
haciendo la prueba más individualizada.
Ej. Cuatro sondas con las siguientes
probabilidades:
A= B=
C= D=
Uno en un millardo la probabilidad de otra
persona seleccionada al azar tenga las
mismas bandas.
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3. Reacción de la cadena de Polimerasa (PCR):
Variant Number Tandem Repeat (VNTR)
Short Tándem Repeat (STR)- El número de
bases que se repiten es menor que en VNTR
y el número de repeticiones también es
menor. Son secuencias pequeñas que se
repiten consecutivamente.
En PCR vamos a reproducir un pedazo
pequeño de DNA millones de veces.
Pasos en PCR:
Calentar a 94° C para separar las
hileras de DNA.
Anadir iniciadores y bajar la
temperatura para que se unan al DNA.
Añadir la polimerasa y una mezcla de
nucleótidos (GATC) y calentar a 72° C
para que se reproduzca el STR en las
dos (2) hileras. [el primer ciclo
reproduce cuatro (4) hileras]. 30 ciclos
reproducen 1, 000,000 de copias a 2
minutos por ciclo.
Separación por Electrophoresis.
PCR se usa para producir hileras cortas (200
bases) y estas se degradan menos. Se STR- Son abundantes en el genoma humano.
necesita menos DNA para PCR. La técnica La secuencia de bases que se repiten están
amplifica muestras tan pequeñas como 10-9 entre tres (3) y siete (7) bases y el largo total
gramos. de las repeticiones es menor de 400 bases.
Se utiliza STR de diferentes locus que las
bandas no interfieran una con las otras.
Multiplexing- La técnica que
simultáneamente detecta más de un STR en
un solo análisis. Se producen 2 bandas
identificadas una del padre de tres (3)
repeticiones y una por la madre de cinco (5)
repeticiones por tanto este locus es (3, 5).
Si se utilizan varios locus se va
individualizando la evidencia de DNA.
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4. La secuencia de bases se comprara con
aproximadamente 5,000 secuencias
diferentes en el banco de datos para ver su
frecuencia en la población la secuencia
puede ser común, rara o única. El mt-DNA no
tiene la capacidad de discriminación del DNA
nuclear.
Evidencia biológica para DNA:
Ej. THIO, TPOX y D75820 Se puede hacer un análisis con 250pg si la
célula tiene 7pg de DNA solo se necesitan
[Blanco] 0.081 x 0.195 x 0.065= 0.00103= 0.36 células para análisis. La cantidad tan
1/974 baja necesaria permite el análisis en sangre
seca, mancha de semen, en sellos y sobres
El locus Amelogenina en el cromosoma del
tocados con saliva, vasos, latas, goma de
sexo. Hay varios STR-Y en el cromosoma Y.
mascar, bandas para el sudor, sabanas, tejido
Para mezclar varios varones se pueden usar 6
transferido, guantes, bolígrafos, gorras,
STR diferentes en el cromosoma Y. El
sombreros etc.
cromosoma X no dará ninguna banda. STR-Y
da una banda por locus. El locus Hay que perpetuar la localización de
Amelogenina da dos (2) bandas para varón y la evidencia y no afectar posibles
una para la mujer. patrones de sangre.
Ropa, toallas, paños, sabanas, etc.
DNA mitocondrial:
Empacar en bolsas de papel para
El DNA mitocondrial se hereda de la madre evitar hongos.
solamente y se encuentra en las La sangre se saca con un hisopo
mitocondrias que están en el citoplasma de húmedo y se toma muestra control
la célula. En la célula hay un núcleo con DNA de al lado.
nuclear y hay entre 500 y 1,000 Toda evidencia debe mantenerse en
mitocondrias. Por esta ser abundante se nevera o frasco.
puede usar cuando el DNA nuclear esta Sangre control o tejido epitelial. Ej.
degenerado. Ej. Cuerpos quemados, troncos Cepillo de dientes, pelo, navajas.
de pelo sin raíz, hueso, dientes etc.
El análisis de mt-DNA es más laborioso y más
costoso. El mt-DNA es circular y consta de
16,569 bases y 37 genes. Hay dos regiones
que tienen hipervariabilidad. HV-1 (342b) y
HV-2 (268b). Mediante PCR se multiplican
estas regiones luego se determina el orden
que aparecen las bases en esta región esto
se conoce como secuenciamiento.
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