Primera Clase

6. MÉTODOS DE ESTUDIO EN BIOLOGÍA CELULAR OBJETIVOS Describir los fundamentos de las siguientes metodologías: Identificar las utilidades de cada una, evaluando su grado de complejidad - microscopía óptica y electrónica - centrifugación total y fraccionada - ultracentrifugación Bibliografía: H. Curtis, B. Alberts - cultivos celulares - electroforesis

7. ‘ micros’ = pequeño ‘ scopein’ = ver

8. MICROSCOPÍA Kepler 1611

9. Simple Utilizan una sola lente (lupas) Compuesto Utilizan dos sistemas de lentes ocular objetivo

10. LUPA La lente se sitúa entre el ojo y el objeto Aumenta el ángulo visual 4 a 60 aumentos Aumento Cantidad de veces que se ve mayor el objeto

11. 0,1 a 0,2 mm Resolución Capacidad de percibir dos puntos de una muestra separadamente ( criterio Rayleigh) Identifica objetos que estén separados al menos 100 micrones

12. Electrónica Transmisión (TEM) Barrido (SEM) Campo claro Campo oscuro Contraste de fase Fluorescencia MICROSCOPÍA Aportan información descriptiva y estructural Confocal Óptica

13. Microscopio óptico Campo claro Campo oscuro Contraste de fase Fluorescencia

14. Microscopio electrónico de transmisión TEM

15. SEM

16. Microscopía Laser Confocal

17. MICROSCOPÍA

18. MICROSCOPÍA

19. MICROSCOPÍA SEM Aumenta 10X sobre MO

20. MICROSCOPÍA TEM Aumento de 1000 x sobre MO

21. MICROSCOPÍA TEM

23. MICROSCOPÍA

24. CENTRIFUGACIÓN Rotor Motor Cabezal Refrigeración Vacío

25. CENTRIFUGACIÓN Unidades Rpm. La fuerza centrífuga está determinada por el diámetro del rotor y la velocidad de rotación. TOTAL

26. CENTRIFUGACIÓN FRACCIONADA

29. CENTRIFUGACIÓN EN GRADIENTE DE CONCENTRACIÓN Utilidad separación de diferentes proteínas

30. ELECTROFORESIS Separación de proteínas y ADN por su PM SOPORTES Acetato de celulosa Uso clínico Acrilamida (Proteínas ) Agarosa (ADN) Investigación

31. ELECTROFORESIS Buffer Ánodo (+) Caja acrílica Muestra Cátodo (-) Acrilamida (gel) SDS-PAGE

34. ELECTROFORESIS SDS-PAGE

36. 3EIMMBLOT.MOV

38. Células CHO - Rab22-GFP

39. MÉTODOS PARA ÁCIDOS NUCLEICOS

42. Estructura del ADN

48. Bromuro de etidio

50. ANÁLISIS DE LAS BANDAS DE AMPLIFICACIÓN OBTENIDAS. REA (restriction enzime analysis) RFLP (restriccion fragment length polymorphims) RADP-PCR (randomprimed)