4. Pendientes
• ADN ribosomal ADNr.
Secuencia de ADN contenida en los
cromosomas del núcleolo que
codifica ARN ribosomal, muy utilizado en
estudios filogenéticos por su bajo
porlimorfismo genético.
5. MUTACIONES MOLECULARES
• Silenciosas
• Neutra
• Cambio de sentido o
missense (cancer
colorectal)
• Sin sentido o non sense
(Talasemia)
• Adición deleción o
frame shift (Fibrosis
quistica)
• AGG x CGG (Arg)
• AAA x AGA (Lys – Arg)
• UCA x UUA (Ser – Leu)
• AGA x STOP
• AGA TCT AGG GAA
• AGA TCC TAG GGA AT…
• AGA TTA GGG AAT
6. Programas para biomodelos
• Jmol, Chime, RasMol.
• http://www.biorom.uma.es/contenido/bi
omodel/model1j/dna/inicio.htm
9. AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS IN VITRO
• Amplificación del ADN diana. Reacción en
cadena de la polimerasa (PCR), la
autorreplicación de la secuencia (3SR) y la
amplificación por desplazamiento de la hebra
(SDA).
• Amplificación de la sonda, que incluye la
replicasa Qß o la reacción en cadena de la
ligasa (LCR).
• Amplificación de la señal, en los cuales la señal
generada por cada sonda es aumentada.
10. Variaciones de la PCR RT-PCR
• RT-PCR
http://www.biorom.uma.es/contenido/U
IB/pcresp/index.html
• Q-PCR
http://www.youtube.com/watch?v=e74Y
YdSHraY
11. Variaciones de la PCR
PCR
DESCRIPCCION
PCR anidada
A partir de un amplicón se aplican nuevos
primes. Aumenta la sensibilidad.
PCR de extensión solapada
Cambios de secuencia introducidos dentro de
fragmentos (clonados) de ADN. 4 primers con
productos de ADN mutado solapados.
PCR in situ
En portaobjetos sobre tejido o células. Se hace
amplificación del ADN e hibridación in situ.
PCR múltiple
Amplificación simultánea de más de una
secuencia.
RT-PCR
ARN es el molde inicial y la enzima es
transcriptasa inversa que forma cADN.
Q -PCR
Cuantifica ADN o ARN en tiempo real. Se
detecta basándose en fluorocromos o sondas.
Otras
e-PCR, AFLP, Colonia, Asimétrica, Específica de
alelo, Hot start, ISSR, Touchdown, Tail, MLPA,
Inversa.
17. Amplificación isotérmica
de ácidos nucleicos
LAMP
“Sistema que utiliza una polimerasa
con alta actividad de desplazamiento
de cadena (Bst) y un sistema de dos
cebadores internos y dos cebadores
externos para reconocer un total de
seis secuencias distintas en el ADN
blanco”
-producción material inicial
-Ciclos de amplificación y elongación.
-Reciclaje.
23. SECUENCIACION
• Determinación de la
secuencia de nucleótidos
de una molécula
específica.
• -Método químico
• -Método enzimático
• Detección de
mutaciones, aplicaciones
forenses, ADN fósiles,
diagnóstico de
enfermedades.