1. Caso clínico
Autor: Kenneth Walker

2. El problema
Un grupo de investigadores están interesados en
realizar un estudio ultraestructural sobre el
Campylobacter jejuni.
Considerando que hay escasa bibliografía al
respecto, están convencidos de que los resultados
serán un aporte importante.
Para realizar este estudio acuden a la UMA donde
usted es el tecnólogo médico jefe.

3. La muestra
Le envían un
características:
cultivo
 Antigüedad de 48 hrs.
 Agar tipo Campy-Back
 Con suplementos
 Con 5% de sangre
con
las
siguientes

4. Antecedentes
 Bacterias del género Campylobacter son una de las causas más
comunes de enfermedad diarreica.
 La mayoría de los casos se presentan como aislados o eventos
esporádicos, no como parte de brotes reconocidos.
 La red de vigilancia FoodNet en USA, indica que cerca de 14 casos
son diagnosticados cada año por cada 100.000 personas en el
población.
 La campilobacteriosis afecta a más de 1,3 millones de personas
cada año.

5.  Es mucho más frecuente en los meses de verano pues se favorece
de las altas temperaturas.
 El microorganismo es aislado de los niños y adultos jóvenes de
sexo masculino con más frecuencia.
 Aunque la infección no suele causar la muerte, se estima que 76
personas mueren cada año por esta infección.

6. Campylobacter jejuni
 Bacilo con forma de espiral, flagelado, oxidasa (+) y
Ureasa (-)

7.  Puede causar enfermedades en los seres humanos y los animales.
 La enfermedad humana es provocada en su mayoría por
Campylobacter jejuni.
 C. jejuni crece mejor a 37°C - 42°C, similar a la temperatura
corporal aprox. de un ave.
 Las aves son portadoras.

8.  Estas bacterias son frágiles. No pueden tolerar la desecación.
 Crecen sólo en lugares con menos oxígeno que el atmosférico (3%
- 10% de oxígeno).

9. Materiales y métodos

De las placas de cultivo, se toman muestras
de las colonias bacterianas.

La muestra se suspende y fija en una misma
solución durante 2 horas a 4 ° C.

Esta solución se compone de glutaraldehído
al 2,5% en PBS.

Luego se realiza un lavado.

Se realiza una postfijación con solución al
1% de Tetróxido de Osmio.

10. 
Las muestras se deshidratan con una batería de etanoles progresivos de 30%,
40%, 50%, 60%, 70%, 90%, y 95% por 5 minutos y 100% durante 10
minutos. Todo a temperatura ambiente.

Impregnación en solución de Acetona con Resina EPON 812 en concentración
creciente.

Inclusión en EPON 812 (Oukenn, Tokio, Japón).

Corte en Ultramicrotomo.
“Tinción” con acetato de uranilo al 2% o “Tinción” con acetato de Plomo
Preparación Solución original de Sato, 1968
Nitrato de plomo 1gr
Acetato de plomo 1gr
Citrato de plomo 1gr
Citrato de sodio 2grs

11.  Para tinción negativa, las células bacterianas cultivadas se
suspenden en agua.
 Una gota de la suspensión se aplica a una grilla cubierta de
colodión.
 Adición de una gota de 1% de Acetato de Uranilo durante
30-60 s.
Reunión con investigadores

12. Resultados
Reunión con investigadores

13. TEM micrographs (negative‐stain images; d–f)
Campylobacter jejuni shapes and flagella. Rod-like
shape and spiral shape.
Scale bars, 1 um.
Nacen los siguientes problemas:
•
¿Hay dos formas confirmadas para una misma
bacteria?
•
¿Será que una es más móvil que otra debido a su
forma?
•
¿Doble flagelo? ¿Será más rápida que otras
bacterias flageladas?

14. TEM micrographs
(thin‐section images)
unique structures in
the flagellate polar
regions (polar cup‐like
structure) of
Campylobacter jejuni
of
(a, b) Motile spiral
shape.
In (a) TEM
micrographs:
Polar cup‐like structure
at higher magnification
are shown in a panel in
the right and middle
lower corner. Arrow,
polar hollow for a
flagellum; black
arrowhead, polar
cup‐like structure;
white arrowhead,
inner membrane.
Numerals to the right
of scale bars represent
um.

15. TEM micrographs showing
funnel shapes in the flagellate
polar regions of Campylobacter
jejuni.
(a,b) Negative‐stain images by
TEM. (c) Thin‐section image by
TEM. Arrow, flagellum; black
arrowhead, funnel shape;
white arrowhead, membrane
in (b) and ring structure in the
extreme pole region in (d).
In (a) an electron micrograph
at lower magnification is shown
in an inset panel in the right
upper corner. (a, b)The inner
tubular structure seems to
extend from the inner
membrane, developing into a
funnel shape.
(a–c) The funnel shape opens
onto the bacterial cell surface.
Numerals to the right of scale
bars represent um.

16. Referencias

Unique features of the motility and structures in the flagellate polar
region of Campylobacter jejuni and other species: an electron
microscopic study. Tatsuo Yamamoto 2012

Revista argentina de microbiología. versión On-line ISSN 1851-7617 Rev.
argent. microbiol. v.40 n.3 Ciudad Autónoma de Buenos Aires jul./sep.
2008

Microbiology: An Introduction (11th Edition) Gerard J. Tortora, Berdell R.
Funke, Christine L. Case

Servicio General de Microscopía Analítica y de Alta Resolución en
Biomedicina . Servicios Generales de Investigación. Vicerrectorado de
Investigación. Universidad del País Vasco UPV/EHU

Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Rd. Atlanta, GA
30333,
USA.
http://www.cdc.gov/nczved/divisions/dfbmd/diseases/campylobacter/