Curso: Ingeniería Genética en Biomedicina. Maestría en Inmunología, FEC-LUZ

1. Animales Transgénicos como
herramientas de trabajo
Daniel Pérez-Witzke, M.Sc.
Laboratorio de Patología celular y molecular,
Centro de Medicina Experimental, IVIC

3. Mecanismos de recombinación
en Mamíferos

8. Técnicas para edición de
genomas

10. Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs)

14. Modelos de enfermedad
Animales Knockout

16. Autoinmunidad TH2,
Modelo
Lupus eritematoso sistémico
Kaveri y col. (2010). Basophils and Nephritis in Lupus.
n engl j med 363;11

19. Sistema Cre-LoxP

23. Biología de la proteína HSP-70 en la
fisiopatología de la hipertensión
arterial esencial
Daniel Perez-Witzke, MSc.

30. Próximo paso: Noquear HPS-70

34. Inhibición la expresión de los
genes HSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces
(knockout)

35. Floxed HSP70.1
HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre/Ksp-Cadherin
promotor renal
GFP (doble transgenico)
[Rata transgenica A]
Células Renales5´ Ksp-
Cadherin
Cre
Recombinasa
3´
3´ 5´
5´ L
o
x
P
Promotor
L
o
x
P
Exón 1
HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
Enzima
Cre
Transcripción/
Traducción
Recombinación
5´
LoxP
Exón 1 HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
Promotor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-
(knockout)
Ratas A-C homozigotos de la F3
(triple transgenico)

36. Floxed HSP70.1
HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre-mER
(mutant Estrogen Receptor)
(doble transgenico)
[Rata transgenica B]
Células Somáticas
5´
mER Cre Recombinasa
3´
3´ 5´
5´ L
o
x
P
Promotor
L
o
x
P
Exón 1
HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
Enzima
Cre
Transcripción/
Traducción
Recombinación
5´
LoxP
Exón 1 HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
Promotor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-
(knockout)
Tamoxifeno
Ratas B-C homozigotos de la F3

37. 2. Sistema Cre-LoxP mediante
infección con virus AAV-2-Cre
(knockout condicional)

38. Floxed HSP70.1 HSP70.3
genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ L
o
x
P
Promotor
L
o
x
P
Exón 1
HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
Enzima
Cre
Recombinación
5´
LoxP
Exón 1 HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
Promotor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-
(knockout)
AAV-
2/Cre
Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´
Traducción
Infección con virus
con tropismo por células renales
ssDNA

39. Sobreexpresión de los genes
HSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces

40. Floxed HSP70.1 HSP70.3
genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ L
o
x
P
Promotor
Wildtype
(Wt)
L
o
x
P
Exón 1
HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
Enzima
Cre
Recombinación
Homologa
AAV-
2/Cre
Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´
Traducción
ssDNA
PromotorβA
LoxP
dsDNA
LoxP
5´ L
o
x
P
Promotor
β-Actina
L
o
x
P
Exón 1
HSP70.1
HSP70.3
3´
3´ 5´
PromotorβA
LoxP
dsDNA
LoxP
Promotor Wt
LoxP
dsDNA
LoxP

41. Gracias