2. CITOGENETICA MOLECULAR
Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para
hibridizarse entre sí.
Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.
3. CITOGENÉTICA MOLECULAR
Biología molecular y citogenética.
Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación
por fluorescencia in situ (FISH).
4. FISH
Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con
sustancias fluorescentes puede observarse la señal
inmediatamente después del FISH al microscopio de
fluorescencia.
Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas
como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas
fluorescentes que permiten su observación al
microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad
de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con
la técnica “nick translation
9. - Reconoce 2 - 3% secuencias
centromericas.
- Detección de cromosomas
concretos
- Anormalidades numéricas
-
Secuencia especifica del ADN:
LOCUS DETERMINADO
- Reordenamiento estructurales
- Anormalidades estructurales
Detección de cromosomas
concretos
Anormalidades numéricas
14. TECNICA DE FISH
PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA
PREPARACION DE LAS PLACAS
PREPARACION DE LAS SONDAS
HIBRIDACION
LAVADOS POST-HIBRIDACION
DETECCION
TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o
DAPI)
VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
20. PCR
Técnica que permite la amplificación in vitro de una
secuencia específica de ADN hasta generar millones de
copias de una manera rápida y sencilla
Permite analizar muestras con cantidades mínimas de
ADN
21. FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR
Separar las hebras molde para la síntesis de
nuevas hebras
“Aparear” primers a la hebra molde para dirigir
la síntesis de DNA .
La síntesis de DNA requiere de primers para
comenzar.
Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la
hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra
madre como molde
A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de
forma exponencial, la secuencia diana de ADN
24. Sondas marcadas
fluorescentemente son para
cada cromosoma hechas
para marcar DNA específico
de cada cromosoma con
diferentes fluoróforos.
La diferencia espectral generada por el
etiquetado combinatorio son capturadas y
analizadas usando un interferómetro agregado a
un microscopio de fluorescencia.
El programa de procesamiento de imágenes
entonces asigna un pseudocolor a cada
combinación espectralmente diferente,
permitiendo la visualización de cromosomas
coloreados.