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CITOGENÉTICA MOLECULAR

BÉJAR VILELA ROSARIO
CITOGENETICA MOLECULAR
 Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para
hibridizarse entre sí.

 Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.
CITOGENÉTICA MOLECULAR
 Biología molecular y citogenética.
 Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación
por fluorescencia in situ (FISH).
FISH

 Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con
sustancias fluorescentes puede observarse la señal
inmediatamente después del FISH al microscopio de
fluorescencia.
 Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas
como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas
fluorescentes que permiten su observación al
microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad
de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con
la técnica “nick translation
Citogenética molecular
Citogenética molecular
Citogenética molecular
ADNsc
- Reconoce 2 - 3% secuencias
centromericas.
- Detección de cromosomas
concretos
- Anormalidades numéricas

-

Secuencia especifica del ADN:
LOCUS DETERMINADO
- Reordenamiento estructurales
- Anormalidades estructurales

Detección de cromosomas
concretos
Anormalidades numéricas
Citogenética molecular
Citogenética molecular
Citogenética molecular
Citogenética molecular
TECNICA DE FISH
 PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA
 PREPARACION DE LAS PLACAS
 PREPARACION DE LAS SONDAS
 HIBRIDACION
 LAVADOS POST-HIBRIDACION

 DETECCION
 TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o
DAPI)
 VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
Citogenética molecular
Citogenética molecular
Citogenética molecular
Citogenética molecular
Citogenética molecular
PCR
 Técnica que permite la amplificación in vitro de una
secuencia específica de ADN hasta generar millones de
copias de una manera rápida y sencilla
 Permite analizar muestras con cantidades mínimas de
ADN
FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR
Separar las hebras molde para la síntesis de
nuevas hebras

“Aparear” primers a la hebra molde para dirigir
la síntesis de DNA .
La síntesis de DNA requiere de primers para
comenzar.

Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la
hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra
madre como molde
A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de
forma exponencial, la secuencia diana de ADN
Citogenética molecular
Citogenética molecular
 Sondas marcadas
fluorescentemente son para
cada cromosoma hechas
para marcar DNA específico
de cada cromosoma con
diferentes fluoróforos.
 La diferencia espectral generada por el
etiquetado combinatorio son capturadas y
analizadas usando un interferómetro agregado a
un microscopio de fluorescencia.
 El programa de procesamiento de imágenes
entonces asigna un pseudocolor a cada
combinación espectralmente diferente,
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Citogenética molecular

  • 2. CITOGENETICA MOLECULAR  Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridizarse entre sí.  Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.
  • 3. CITOGENÉTICA MOLECULAR  Biología molecular y citogenética.  Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación por fluorescencia in situ (FISH).
  • 4. FISH  Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con sustancias fluorescentes puede observarse la señal inmediatamente después del FISH al microscopio de fluorescencia.  Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas fluorescentes que permiten su observación al microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con la técnica “nick translation
  • 9. - Reconoce 2 - 3% secuencias centromericas. - Detección de cromosomas concretos - Anormalidades numéricas - Secuencia especifica del ADN: LOCUS DETERMINADO - Reordenamiento estructurales - Anormalidades estructurales Detección de cromosomas concretos Anormalidades numéricas
  • 14. TECNICA DE FISH  PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA  PREPARACION DE LAS PLACAS  PREPARACION DE LAS SONDAS  HIBRIDACION  LAVADOS POST-HIBRIDACION  DETECCION  TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)  VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
  • 20. PCR  Técnica que permite la amplificación in vitro de una secuencia específica de ADN hasta generar millones de copias de una manera rápida y sencilla  Permite analizar muestras con cantidades mínimas de ADN
  • 21. FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR Separar las hebras molde para la síntesis de nuevas hebras “Aparear” primers a la hebra molde para dirigir la síntesis de DNA . La síntesis de DNA requiere de primers para comenzar. Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra madre como molde A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de forma exponencial, la secuencia diana de ADN
  • 24.  Sondas marcadas fluorescentemente son para cada cromosoma hechas para marcar DNA específico de cada cromosoma con diferentes fluoróforos.  La diferencia espectral generada por el etiquetado combinatorio son capturadas y analizadas usando un interferómetro agregado a un microscopio de fluorescencia.  El programa de procesamiento de imágenes entonces asigna un pseudocolor a cada combinación espectralmente diferente, permitiendo la visualización de cromosomas coloreados.
  • 25. SKY