1. Diagrama de flujo del manejo de un laboratorio in-vitro de bajo costo operado por pequeños
productores de yuca y ñame de los municipios de San Jacinto (Bolívar) y Ovejas (Sucre)
Primer paso: Desinfección de cristalería, preparación y esterilización de medio de cultivo
3. Medición (peso y volumen) de las cantidades necesarias de la soluciones de
2. Esterilización en autoclave de los frascos vacíos y las tapas trabajo para la preparación de un litro de medio de cultivo.
previo a la servida del medio de cultivo durante 45-60 minutos.
El proceso de lavado, esterilización y preparación de medio de
cultivo se lleva a cabo en la cocina (parte externa del laboratorio
rural)
1. Lavado de la cristalería con agua, jabón e hipoclorito
antes de usar en la preparación del medio de cultivo,
B
Servida de medio de cultivo en frascos limpios
C A
6. Servida del medio de cultivo en frascos limpios
5. Calentamiento del gelificante en estufa de gas y mezcla con
la Solución 1. Agitar bien para homogenizar el medio de cultivo (A) Preparación de la Solución de medio de cultivo (1) con agua de bolsa.
(B) Determinación y calibración del pH = 6 y
(C) Uso de jugo de limón o soda para ajustar el pH del medio de cultivo
7. Una vez haya solidificado el medio de cultivo se
procede al sellado de frascos previo a la esterilización 9. Solo cuando la presión haya bajado, se abre la autoclave, se saca y
se traslada el medio de cultivo estéril al cuarto de propagación.
Allí se mantiene en sitio fresco y se espera de 3-5 días antes de usarse.
8. Proceso de esterilización en autoclave a 15 libras de presión durante 15-20 min.

2. Segundo paso: Recepción de material in-vitro certificado y propagación del mismo en medio de cultivo
10. Aplicación al banco de germoplasma para obtener material 11. Recepción del germoplasma y puesta a crecer bajo condiciones de cuarto de 12. Previo a la fase de propagación se debe limpiar la
certificado libre de patógenos y enfermedades. Firma del SMTA crecimiento o invernadero del laboratorio rural superficie de los frascos con solución de jabón e
hipoclorito para remover contaminantes del ambiente
A
B
15. En la cámara de flujo, con las herramientas flameadas 14. En la cámara de flujo laminar de bajo costo diseñada por el CIAT (A) se realiza el proceso 13. El proceso de multiplicación se lleva a cabo en el cuarto
se toma las plantas crecidas en in vitro y se pasan a un de propagación. Previo a esto se debe limpiar con alcohol al 70% su interior, encender el de propagación ubicado en su parte interna del laboratorio
papel esterilizado para su corte sistema y dejar secar. Luego con la ayuda de un mechero y con cuidado se queman (flamean) rural
las herramientas varias veces (B) evitando tocarlas al final del proceso
16. Esterilización de los implementos a usar durante la propagación. 17. Con la ayuda de una pinza larga y un bisturí con hoja No 10 se 18. Siembra del tejido en medio nuevo. Los ápices y nudos se
Nótese el papel encima del azulejo como soporte para el corte del tejido. realizan cortes a los ápices (parte superior terminal) y los nudos o siembran por separado con una densidad de siembra de 5
Todo el material debe estar flameado (pinzas y bisturí) o esterilizado yemas (donde se insertan las hojas) unidades/recipiente.
(cajas, papel, azulejo, medio de cultivo) antes de iniciar el proceso.
B
H
H
V
19. Descarte de material contaminado ya sea por hongo o bacteria
durante el proceso. (H= Hongo , B= bacteria). Los gráficos se
incluyen como referencia.
21. En algunos frascos se desarrollan hongos en la tapa (H), los cuales deben 20. Material propagado creciendo bajo condiciones de laboratorio rural.
ser limpiados con hipoclorito antes de iniciar un ciclo de propagación. En los Cada frasco se cierra con cinta Vinilpel® (V), con una tapa o en algunos
círculos se detalla la oxidación de las partes metálicas. casos con papel aluminio para evitar la entrada de contaminantes.

3. Tercer paso: Endurecimiento y transplante a condiciones de vivero. Escalamiento de material bajo condiciones no-
controladas
(B)
(A)
22. Selección del material a transplantar a suelo. Se debe escoger 23. Preparación de sustrato de mejor comportamiento en cada 24. Retirar las plantas del recipiente y colocarlas en agua. Lavar bien
material vigoroso, verde intenso, con buen desarrollo de hojas y raíces. localidad. Desinfectar de acuerdo al protocolo establecido (químico . raíces y teniendo cuidado de no partir las plantas Mantener húmedas
Eliminar la cinta de Vinilpel® una 3-5 días antes de las siembra. Agua caliente o pro solarización). (A) en bolsa (B) en canales las manos durante la manipulación de las plantas.
25. Siembra de plantas en bolsa con sustrato tratado. Nótese el uso del palo
ahoyador y el recipiente para regar el sustrato. Una planta ocupa una bolsa
26. Procedimiento desarrollado en Ovejas. Nótese la manera de manipular la planta durante el (Siembra en San Jacinto)
transplante.
27. Cámara húmeda con vaso de Icopor® en
cada planta para prevenir la deshidratación
y muerte de la planta
28. Mantener las plantas en vivero cubiertas durante 5 días. 29. Plantas endurecidas, descubierta para continuar con su desarrollo bajo
30. Detalle de plantas endurecidas y crecidas en canales, Nótese la
Mantener riego controlado y cuidados de ataques de hormigas condiciones naturales. Mantener el control de riego, fertilización y hormigas.
ubicación de los aspersores para el riego y el espacio entre las
Identificar cada variedad con un rotulo
plantas.
31. Plantas despuntadas para incrementar el numero de plantas en el vivero (escalamiento). Las plantas madres se mantienen en una cama y la
hijas en otra área. Los cuidados y practicas culturales se deben mantener en el vivero hasta el transplante a definitivo a campo. Nótese el vigor de
las plantas base del proceso.